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色譜峰保留時間變化常見原因和解決方法

更新時間:2017-03-28      點擊次數(shù):5147

   確定色譜峰保留時間不穩(wěn)定的原因首先需要找出變化的模式。保留時間在多次進(jìn)樣間隨機(jī)變化。建議首先檢查泵和溶劑混合裝置。校驗泵是否工作正常,可以用量筒和秒表來測量流速。校驗流動相組成沒有變化,可以在流動相中加入跟蹤劑來觀察基線的變化。如果流動相組成是穩(wěn)定的,基線也應(yīng)該很穩(wěn)定。如果流動相組成有變化,你會觀察到基線的相應(yīng)變化。舉例說明,如果你使用反相條件,UV檢測器,可以在有機(jī)相溶劑中加入0.1%的丙酮,監(jiān)測254 nm下的基線變化。另一種方法也可以,你需要人工配制流動相,然后通過溶劑混合裝置。如果保留時間的變化消失了,問題就出在溶劑混合裝置上。

 一天之內(nèi)的進(jìn)樣保留時間一致,但是不同天數(shù)之間的保留時間變化

   這種情況下,儀器本身不太可能有問題。保留時間變化zui有可能的原因是流動相組成的變化。在反相色譜中,保留因子k和流動相中有機(jī)溶劑的體積含量成指數(shù)關(guān)系。根據(jù)經(jīng)驗,如果有機(jī)溶劑含量誤差1%,那么保留時間的變化在5%到15%之間,典型情況在10%左右。建議仔細(xì)稱量有機(jī)溶劑,的配制流動相方法是用質(zhì)量稱量代替體積稱量。

   此外,流動相如何脫氣也可能導(dǎo)致保留時間的變化。的脫氣方法是使用真空超聲脫氣大約一分鐘左右,這會zui大程度的減少溶劑蒸汽的揮發(fā)。另一個方法是用氦氣流噴射,在流動相被氦氣平衡后,氦氣流必須被關(guān)閉,否則氦氣會帶走溶劑蒸汽,溶劑的組成會由于蒸發(fā)而發(fā)生變化。

    如果樣品組成是離子狀態(tài)或者離子化的,那么控制流動相的pH值非常重要。小到0.1單位的pH變化會導(dǎo)致保留時間漂移10%左右。所以準(zhǔn)確測量pH值并保證pH儀被很好地的校準(zhǔn)。在反相色譜中,隨著流動相pH值的升高,酸保留時間會減少,堿的保留時間會增加。

  

色譜峰保留時間朝同一個方向漂移

    如果所有色譜峰的保留時間都朝同一個方向漂移,很可能是溫度原因所致。根據(jù)經(jīng)驗,每℃的變化導(dǎo)致保留時間變化大約1%到2%左右。在通常情況下沒有什么問題,但是在許多地方空調(diào)和暖氣在周末的時候會關(guān)閉,然后會出現(xiàn)樣品在周末的保留時間會和平時不一樣。使用柱溫箱可以很好的避免這個問題。

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